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Phos-tag? Biotin

無(wú)特異性磷酸化抗體時(shí)的理想選擇！

　　Phos-tag? Biotin 是與生物素結(jié)合的 Phos-tag?，可用于免疫印跡法檢測(cè)磷酸化蛋白。Phos-tag? Biotin BTL-104 和 BTL-105 可靈敏檢測(cè) PVDF 膜上的磷酸化蛋白。

◆原理

◆優(yōu)點(diǎn)、特色

●  無(wú)輻射。

●  無(wú)需 PVDF 膜的封閉處理。

●  Phos-tag? 的特異性結(jié)合與氨基酸種類(lèi)、序列無(wú)關(guān)。

●  可適用于免疫印跡和質(zhì)譜分析等后續(xù)工作。

●   Phos-tag? BTL 母液可穩(wěn)定保存至少６個(gè)月。

●  實(shí)驗(yàn)流程與使用 HRP 標(biāo)記抗體相類(lèi)似。

※BTL-104、BTL-105、BTL-111 三者連接鏈（Linker）長(zhǎng)度不一，但使用上基本相同。BTL-111 靈敏度更高。

◆案例、應(yīng)用

【使用例：在 PVDF 膜上檢測(cè)磷酸化蛋白】

　　轉(zhuǎn)印在 PVDF 膜上的磷酸化蛋白可精確檢測(cè)到 ng 級(jí)水平，沒(méi)有檢測(cè)到相應(yīng)的去磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白的信號(hào)斑點(diǎn)。

　　免疫印跡檢測(cè)磷酸化蛋白——Phos-tag ? 生物素。

　　摘自 Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749

【使用例：Phos-tag? 生物素在檢測(cè)蛋白激酶活性的微陣列（生物芯片）中的運(yùn)用】

　　蛋白激酶是很多疾病診斷和藥物篩選的靶標(biāo)。近來(lái)有科研人員研發(fā)了一種檢測(cè)胞內(nèi)蛋白激酶活性的高靈敏度多肽微陣列。用微陣列點(diǎn)樣機(jī)點(diǎn)樣 2 nL 體積的底物多肽溶液，使多肽固定在戊二醛預(yù)修飾的高氨基末端載玻片。

　　當(dāng)多肽經(jīng)細(xì)胞裂解液磷酸化后，用熒光標(biāo)記的抗 phosphotyrosine（磷酸化酪氨酸）抗體檢測(cè)酪氨酸激酶，或者用 Phos-tag? 生物素，接著用熒光標(biāo)記的親和素檢測(cè)絲氨酸或者蘇氨酸激酶。之后用自動(dòng)微陣列掃描儀檢測(cè)熒光信號(hào)。多肽微陣列系統(tǒng)包括簡(jiǎn)單的多肽固定，只需少量樣品，具有高密度陣列。重要的是，檢測(cè)細(xì)胞裂解液蛋白激酶活性的靈敏度高。

　　因此多肽微陣列系統(tǒng)可用于高通量篩選細(xì)胞內(nèi)激酶活性，可用于藥物篩選和疾病診斷。

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